胚胎移植与净化平台提供哪些技术服务？
如有需要详细了解，请联系LAF高老师 saifeigao@hkust-gz.edu.cn ，李老师 aerinyaruili@hkust-gz.edu.cn.
生物净化的目的、净化方式选择、如何申请和服务周期？
一、生物净化的目的是什么？
减少或阻止病原体通过活体小鼠传染给屏障设施内的其他小鼠，从而造成屏障内动物的污染。LAF要求基因工程小鼠进入繁育区必须通过生物净化。
二、小鼠生物净化的方式是什么？
LAF采用胚胎移植的方法进行净化。胚胎移植是通过从胚胎供体的输卵管或者子宫中将着床前期的胚胎分离出来后，转移至假孕母鼠的输卵管或者子宫中，移植后的胚胎可以在假孕母鼠体内着床、孕育和出生。
胚胎获得方式有两种：（1）自然交配（体内交配净化）：雄鼠和超排后的雌鼠交配，检栓，然后处死见栓后的雌鼠，收集受精卵，胚胎移植。我们通常称为体内净化；（2）体外受精（IVF）方式：收集精子和卵子、体外受精（in vitro fertilization，IVF）和胚胎移植。我们通常称为IVF净化。
这个过程受很多因素影响，如精子的质量直接影响到受精率等，虽然我们的大量实验数据表明受精率一般均在60%以上，但我们仍不能保证一次性就可以成功。
三、IVF净化和自然交配，如何选择？
选择IVF净化和体内净化，主要看雄鼠和雌鼠能不能有效交配无论哪种净化方式，生仔数量和提供卵子的雌鼠数量直接相关。假如见栓率高，IVF净化和体内净化得到的产仔数量差不多。
- IVF净化：需要1-2只雄鼠，处死取精子；超排并安乐死所有提供的雌鼠。这种方式不需要考虑雌鼠见栓情况，可以有效避免雌雄鼠交配不见栓导致无法净化，耽误时间。一般推荐雄鼠有2只以上，可以和B6/J等野生雌鼠交配净化的都直接采用IVF净化。
- 自然交配净化：雄鼠数量过少（少于2只）或者交配完成后需要继续保留使用，不能和B6/J等野生雌鼠交配净化（纯合、多基因等其他原因）可以优先使用自然交配方式。
四、如何申请净化服务？
申请净化服务需要下载并填写文件《E001-净化服务申请统计表-V1》，表中有详细的说明，请认真阅读填写相关内容。
五、生物净化技术服务周期是多久？需要多长时间？？
实验动物品系不同，其排卵、受孕等操作存在较大差异，因此净化所需时间可能有所不同。一般为8-10周后可以拿到4周龄的后代。
六、净化后的小鼠质量如何保证符合SPF？需不需要检测？
LAF有完整的哨兵鼠及随机抽检的体系保障净化后的动物质量符合SPF级国标要求。
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生物净化服务，需要课题组提供动物的具体要求？
一、雄鼠的年龄和数量要求： 8周龄以上，最好不要超过8月龄。另外，还要看小鼠健康状态，能让雌鼠见栓即可。
a) 单基因修饰的小鼠，如Tg/KO/KI，假如是杂合并可以和B6等常见品系交配净化的，请提供至少2只雄性。假如有3只雄鼠，可以考虑杀掉一只阳性雄鼠（假如有3只雄鼠即可杀一只），取精子和B6做IVF，一次性可以得到更多的后代。
b) 单基因修饰的小鼠，如Tg/KO/KI，假如是纯合并不可以和B6交配净化的，只能课题组按要求提供雄鼠和雌鼠进行净化，一般同批1：1或者1：2提供，建议扩群保证雌鼠数量。
c) 多基因修饰的小鼠，如TKO/DKO/cKO等，需要先进行扩繁，得到后代后再做交配或IVF净化。假如是纯合，请提供至少2只雄性，雄：雌数量按照1：1或者1：2提供。
二、雌鼠的年龄和数量要求： 因雌鼠要进行激素超排卵，一般要求3-5或者9-12周龄，避开6-8周龄激素不敏感期。另外，还要看小鼠健康状态，能见栓排卵即可。
雌鼠的数量根据净化方式选择和预期仔鼠数量准备。
注意： 净化实验中见栓的雌鼠都会被处死取胚胎，但并不是每个见栓的小鼠都能取到发育正常的胚胎。所以需要留够雌鼠用于繁殖，不要出现断种的情况。
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小鼠胚胎/精子冷冻如何选择？收费标准和保存期限？
一、如从复苏角度考虑：
- 胚胎冷冻复苏后得到的后代就是冷冻的小鼠品系基因型。
- 精子冷冻，复苏后要再进行IVF，才能得到后代，需要考虑卵子提供者，如果是B6/J，那么复苏后得到的后代都是和B6交配的杂合基因型。
二、 如从冷冻的费用考虑：
- 胚胎冷冻在冷冻过程中花费大量时间，主要是获得一定量胚胎所需周期，冷冻费用高，但复苏简单，费用低。
- 精子冷冻则相反，冷冻费用低且耗时短，速度快，但复苏时采用体外受精（IVF）费用相对要高，另外精子复苏可以一次性得到很多只后代。
三、如何选择哪种保存方式呢？
- 多基因敲除一般推荐胚胎冷冻。
- 单基因敲除或者转基因小鼠都推荐做精子冷冻。
- 需要具体情况具体对待。具体选择哪种取决于现有动物数量。
四、 胚胎冷冻、精子冷冻和复苏的费用如何？
请参考《收费标准》。
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IVF快速扩繁服务优缺点介绍？
一、什么是快速大量扩繁？
快速扩繁指使用1-2只雄鼠通过体外受精（IVF, in vitro fertilization）获得大量子代小鼠的方法。
二、快速大量扩繁的原理是什么？
快速扩繁的核心是采用IVF技术，将获能后的精子与卵母细胞进行体外受精并移植入假孕母鼠体内，获得子代小鼠。
三、快速大量扩繁的优势是什么？
• 1-2只阳性雄鼠可在45天后获得至少50只或更多后代；
• 后代出生日期一致，一般相差在2-3天内；
四、快速大量扩繁的缺点是什么？
• 更适合卵子提供者是易得到的雌性野生型小鼠，如B6/J；
• 更适合用户需求的后代是杂合子小鼠。假如需要纯合子，需要再次交配或IVF得到。
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重要品系雄性动物丧失交配能力或突发死亡后，如何挽回小鼠？
重要品系雄性动物突发死亡，或雄性无法完成和雌性受精，我们都可以尝试通过体外受精（In vitro fertilization，IVF）的实验来解决。一般雄鼠死亡在几个小时内的品系都可以尝试，越快越好（尽快收集死亡雄鼠的附睾保存）。
体外受精（in virtro fertilization，IVF）即在体外环境下，获能的精子和成熟的卵子相混合，完成受精的过程。
IVF中需要注意的问题如下：
- 透明带硬化：随着时间的变化，精子越来越难进入透明带。卵子在体外时间越长，透明带会变得硬化。收集卵子切记要快。
- 温度至关重要。尽可能使用到的仪器设备等物品都保持在37℃。在显微镜旁边设立一个小的培养箱，尽量使受精皿少暴露在室温和空中。
- PH值也很重要。在空气中，培养液的PH值会很快升高。尽量保持受精滴在培养箱内。
- 实验室内挥发性的有机化合物很大程度影响IVF的成功和移植后胚胎的发育能力，实验室环境应维持在最佳空气状态下。
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